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第200章35%（感谢牛津面的盟主！）(第1/2页)
学校的实验室条件没那麽好。
空调老化，地方不大，房间里人也有点多。
条件算是艰苦吧，大家却一点不觉得累，一个个热血沸腾的，就想着快点把这个项目做出来。
陈浩上次这麽有动力的时候还是在大二夏天，跟老江去参加网吧举办的CS1.6网吧赛0
时过境迁。
曾经的M4网瘾少年，现在已经变成使用移液枪的高手了。
蔡卓群将无酶水吸出，打入离心管底部，反覆吹打。
王晓晴观察片刻後说：「测一下吧。」
蔡卓群点点头，拔下枪头，拿着样本走到NanoDrop分光光度计前。
用移液枪吸取了1微升样本，滴在检测基座上，放下检测臂，在连接的旧桌上型电脑上点击了测量。
屏幕上很快跳出了数据。
陆晓林停下了手里的活，转头问道：「多少？」
蔡卓群：「浓度12ng/ul，A260/280比值是1.32，A260/230比值是0.7。
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王晓晴盯着屏幕看了一会儿，有点无奈：「这已经是第四批废样了————」
项目的难度远远超出除江河外所有人的预期。
虽然之前江河用加入DMSO的方法，解决了PCR扩增阶段引物二聚体的问题。
但解决了一个问题，接下来还会出现更多的问题——
现在的瓶颈，卡在了提取上。
miRNA在血液中的含量极低，且非常容易被血液中的RNA酶降解。
纯度不够。
A260/280的比值正常应该在1.8到2.0之间，低於1.8就意味着样本中存在大量的蛋白质污染。
而A260/230比值只有0.7，更是说明里面混了大量的酚类物质或者盐离子。
用这种样本去做下一步的逆转录，杂质会让逆转录酶失活，後面的PCR扩增根本跑不出真实数据。
蔡卓群试图寻找原因：「王教授，是不是氯仿的用量不够？我们在取上清液的时候，可能还是带入了一些中间层的蛋白质。」
王晓晴摇摇头：「上一批我们已经把氯仿的比例提高了百分之二十，离心时间也延长了五分钟，纯度是稍微好了一点，但是浓度直接掉到了5ng/ul以下。」
陆晓林在一旁分析：「血清里全是蛋白，游离的核酸少，TrizoI提取法，用在血清上，天生就有缺陷。」
实验室众人，陷入沉默。
其实在後世，有专门针对血清的柱提法商业试剂盒，傻瓜式操作，半个小时就能得到高纯度的miRNA。
但在08年，专门针对液体活检的试剂盒在国内根本买不到，就算买到了技术也还远未成熟，所以只能用最基础的化学试剂，手工一步步去抠。
蔡卓群问：「王教授，有什麽办法没？」
王晓晴：「别问我，江河呢？江河去哪儿了？」
陈浩举手：「老江说有点事来着，马上回来。」
王晓晴：「那大家先停一下吧，休息十分钟。」
晓晴教授现在也是学聪明了。
自己苦哈哈研究半天，不如江河回来一句话直接解决。
与其浪费脑细胞，还不如休息休息，保存体力————
众人出去休息时。
易向晚和顾亦舟去给大家买水。
在路上，易向晚罕见地没有开玩笑，略显忧愁的说道：「师兄，你说咱们这项目，到底能成吗？」
顾亦舟看了他一眼：「怎麽了？不想干了？」
「哎呀，那肯定不是啊，只是————我在想一件事嗷，退一万步讲，就算我们今天把提取纯度的问题解决了，就算接下来的逆转录、PCR体系全部都解决了，然後呢？」
顾亦舟皱着眉头。
易向晚接着说：「我们该如何验证呢？既然是胰腺癌早筛，那到了最後，验证模型是否有效的话，我们需要真正的患者样本吧？」
「而且，我们需要的是【看起来完全健康，但实际上刚患上极早期胰腺癌的患者的血】。」
其实这个问题，几个核心组员心里都有想过。
只是大家都在闷头干活，谁也没有捅破。
因为胰腺癌的隐蔽性极强。
当患者因为腹痛、黄疸去医院就诊时，往往已经是中晚期了。
极早期胰腺癌，患者自身没有任何症状，常规体检也查不出来。
所以，想要拿到这种样本，唯一的途径就是依靠完善的血清生物样本库。
就是医院长期保存大量体检人群的血清，几年後，当其中某些人被确诊为胰腺癌时，研究人员再把他们几年前还是健康状态时的血清找出来，用来测试江河的早筛模型，看看能不能在几年前的血液里发现异常的miRNA升高。
但现实是，08年的中国，没有医院拥有如此完善的高质量血清生物样本库。
协和也没有。
「所以，如果找不到验证数据，验证数据就没意义————」
「喝什麽？」顾亦舟打断了他。
「啊？哦，呃，可乐吧，可乐就好。」
易向晚接过冰可乐，在自己的脖子上滚了一圈，好凉。
而後他说道：「师兄，我说这个不是打击老大的意思，我的意思是————」
「行了，别解释了，想那麽多干嘛？这些问题是老大需要考虑的，我们现在的任务是把提取这关过了，别到了最後，老大从欧洲、从挪威、从美国把样本找来了，结果咱们连RNA都提不出来，那才叫丢人。
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「靠，也是啊！确实有点想太多了————」
两个人带着水回到实验室。
发现江河已经回来了，正站在NanoDrop的屏幕前。
而且王教授正在乖巧地汇报情况：「纯度提不上去，TrizoI的局限性，血清里的蛋白含量远超组织，吸取上清液的时候，不可避免地会带入杂质，如果要避免带入杂质，就只能吸取最表层的少量液体，但那样RNA的浓度又达不到下游PCR的要求，咋办？」
江河淡然道：「不早跟你们说过了？加糖原。」
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实验室里的人都愣了一下。
老组员虽然听过江河讲这个事情，但是大家都不知道具体该怎麽执行啊————
「噢，怪我，讲的不够细。」
江河随後解释道：「在加入异丙醇沉淀之前，往水相里加入5微升浓度为5mg/ml的糖原作为共沉淀剂，不仅能作为载体帮助极微量的RNA聚集沉淀，还能让最後形成的沉淀团块变得肉眼可见，方便後续洗涤，减少丢失。」
陆晓林思考了一下，提出了疑问：「可是这解决不了杂质的问题啊，只要我们用移液枪吸水相，还是会吸到蛋白。」
江河回答：「所以，洗两遍，双重氯仿抽提，第一次加氯仿离心後，吸取上清液，移入新的离心管，然後，往吸出的这部分上清液里，再加一次等体积的氯仿，剧烈震荡，进行第二次离心，简单来说，牺牲第一次的取液量来换取纯度，然後再通过加入糖原共沉淀，把浓度拉回来。」
这下大家听懂了。
Ⓑ 𝑄 𝙶e 9. 𝑪o 𝙈
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